一直以来科学家们都试图通过对细胞迁移的研究，以求在阻止癌症转移、植皮等医学应用方面取得更大成果。那今天咱就来讲讲细胞迁移研究中的常备技术-细胞划痕实验 为什么要做细胞划痕实验  细胞划痕（修复）法是简捷测定细胞迁移运动与修复能力的方法，类似体外伤口愈合模型，在体外培养皿或平板培养的单层贴壁细胞上，用微量枪头或其它硬物在细胞生长的中央区域划线，去除中央部分的细胞，然后再继续培养细胞至实验设定的时间，然后取出细胞培养板，观察周边细胞是否生长（修复）至中央划痕区，以此判断细胞的生长迁移能力，实验通常需设定正常对照组和实验组，实验组是加了某种处理因素或药物、外源性基因等的组别，通过不同分组之间的细胞对于划痕区的修复能力，可以判断各组细胞的迁移与修复能力。

 

接下来就是我们划痕实验的主要步骤了：

 

 

细胞划痕实验步骤 

1. 划线：先用marker笔在6孔板背后，用直尺比着，均匀的划横线，大约每隔0.5~1cm一道，横穿过孔。每孔至少穿过5条线

2. 铺板：处于对数生长期的细胞，胰蛋白酶消化成单细胞悬液，接种于6孔培养板；细胞铺板6×105个细胞/孔，确保第二天细胞能够长满，每孔最终的培养基总量2mL；

3. 细胞培养37℃、5％CO2培养箱中培养24h

4. 划痕：第二天用枪头比着直尺，尽量垂直于背后的横线划痕，枪头要垂直，不能倾斜(不同孔之间最好使用同一只枪头)

5. 清洗：PBS洗细胞3次，去除划下的细胞，加入无血清培养基

6. 拍照：4倍镜下进行拍照，保证划痕居中且垂直，注意背景一致，可按0，6，12，24h时间点取样，拍照(具体时间依实验需要而定）

细胞划痕实验注意事项 

 

• 避免选择生长特别缓慢的细胞（如：内皮细胞）

  

• 避免选择贴壁不牢的细胞（如：神经母细胞瘤）

  

• 避免选择堆积生长或长不满的细胞（如：巨噬细胞）

  

• 细胞数量一定要铺满，彼此之间没有空隙，否则会影响后续数据分析。

• 在用PBS缓冲液冲洗时，注意贴壁慢慢加入，以免冲散单层贴壁细胞，影响实验拍照结果。

• 一般情况下，大家都会设置对照组和实验组，实验组都是加了各种抑制或促进细胞增长的药物，建议不要把观察时间设置的太长，因为很容易造成细胞污染死亡或者过度增殖造成的假阳性结果。

• 随着细胞的不断迁移，划痕会不断缩小，在计算不同时间点划痕宽度的缩小时，不要计算其相除的比例值，而是要计算想减的差值。

细胞划痕实验常见问题及解决方案  1.细胞划痕时发现细胞没有长满，或是长的太满？ 铺板时的数量须根据细胞的形态、增殖速度、大小进行调节，细胞较小或增殖速度慢，铺板数量需多于6 ×105个细胞/孔；细胞较大或增殖速度较快则需少于6 ×105 个细胞/ 孔； 2.细胞铺板时， 前面铺的孔细胞密度稀， 后面铺的孔细胞密度密？

细胞铺板， 细胞单细胞悬液混合后， 铺板过程中需要边

铺板边晃动管子， 保证细胞在悬液中均匀分布；

3.拍出来的照片背景颜色不一或亮度不一？

在拍照前进行白平衡；固定曝光时间。

好了，今天就讲到这里，希望对大家有帮助。