干细胞是一种能够长期存活，且具有不断自我繁殖能力和多向化潜能，几乎存在于所有组织中的原始细胞。近年来随着科学家们研究的深入，干细胞在血液系统疾病、神经系统疾病、心血管疾病、自身免疫系统疾病以及内分泌疾病等各种疾病的治疗上让人们看到了希望。

所以，胎牛血清作为细胞培养的营养物质，胎牛血清的正确保存和解冻，同样也是各位实验者们，应该关注的一个问题，经过专业人员从其成分中分析，在保证质量的前提下，胎牛血清的正确保存与解冻的方法，总结如下：

1)保存血清的方法?

血清一般储存于－20 ℃，同时应避免反复冻融。若存放于 4 ℃ 时，请勿超过一个月。

2)如何解冻血清才不会使产品质量受损?

我们建议您将血清从冷冻箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室温下使之全融。但必须注意的是，融解过程中必须规则地摇晃均匀。

3)血清中絮状沉淀的处理

沉淀包含纤维蛋白和脂蛋白，这是正常特性，不会影响产品性质。离心血清（400 g，1-2 分钟）或简单的让其沉淀在瓶子底部，将血清小心的转移到另一个无菌瓶里。大多情况轻轻摇动沉淀并加热至 37 ℃就会再溶解。一般不建议采用过滤的方法除去沉淀，因为沉淀会堵塞滤膜而无法过滤。

4)为什么要热灭活血清?有必要做热灭活吗?

加热可以灭活血清中的补体系统，使补体去活化。通常未灭活的补体能够刺激平滑肌收缩、肥大细胞和血小板组胺的释放、激活淋巴细胞和巨噬细胞，同时还能够参与溶解细胞的过程。

诸多研究表明大多数细胞的培养无须进行血清的热灭活；而在免疫学研究和ES细胞、昆虫细胞、平滑肌细胞的培养过程中，推荐使用热灭活血清。实验显示，经正确热灭活处理的血清，对细胞的生长只有微小的促进或完全没有促进作用，而通常因为高温处理影响了血清的质量，造成细胞生长速率降低。并且热处理过的血清，沉淀物明显增多，倒置显微镜下观察呈“小黑点”，往往会使研究者误以为是血清受到了污染，而把血清放于37℃中，沉淀物又会更增多，有会使研究者误认为是微生物的分裂增殖。因此我们建议若非必须，可以不进行热处理，既节省时间又确保质量。

5)热灭活方法?

加热可以灭活补体系统。激活的补体参与溶解细胞事件，刺激平滑肌收缩，细胞和血小板释放组胺，激活淋巴细胞和巨噬细胞。在免疫学研究，培养 ES 细胞、平滑肌细胞时，推荐使用热灭活血清。若必须做血清的热灭活，请遵守56 ℃，30 分钟的原则，并且随时摇晃均匀。血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以无须做此步骤。

1. 用上述描述的方法将血清在低温冰箱或室温下解冻。
2. 在血清解冻时，将一个容器装入适量的水，用于模拟装有血清瓶子在热处理过程中检测瓶内水的温度。容器大小、质地和装水的量最好与装血清的瓶子相同或相似。
3. 待血清彻底解冻时，将含有血清的瓶子放在预热的 56 ℃水浴里，不要将含有血清的瓶子让水淹没或接近瓶子的盖子，以免导致污染。
4. 在开始加热处理时，要及时使用温度计测定模拟瓶内水的温度。
5. 在预热期间，每隔 3-5 分钟要适当摇晃含有血清和水的瓶子，确保瓶内液体均匀加热。6. 一旦模拟瓶内的水温达到 55.8± 0.5 ℃时，开始计时，并在此温度范围内热处理 30 分钟，然后立即放在冰上冷却。

为防止在热处理过程中由蛋白质变性而导致的浑浊和沉淀现象，热处理时应注意下列事项：

1. 不要用高于 25 ℃ 以上的温度加快解冻速度。
2. 在热处理之前，要使血清彻底融解。
3. 不要使热处理的温度高于 56.3 ℃
4. 热处理时间不要长于 30 分钟。
5. 在加热过程中一定要定时摇动血清。

5)解冻方法?

血清从冰箱取出后应慢慢地解冻。最好在 4 ℃ 低温冰箱里放置一天或直到完全融化为止。如果时间不允许低温解冻, 可参考以下解冻方法：

1. 将血清从冰箱里取出后，在室温下放置 15-20 分钟。

2. 然后将血清放置在 37 ℃ 水浴槽里。过高温度会导致血清出现浑浊现象。不要让水淹没装有血清的瓶子。

3. 每隔 5 分钟左右适当摇晃瓶子，直到完全地解冻为止。

注意：再高质量的胎牛血清也要在使用的时候坚持谨慎的原则，因此在解冻血清的时候，要细心地考虑到其解冻时体积一般会增大的特点，事先为血清预留出能够容纳膨胀体积的空间。如此一来，便不会发生污染或者容器冻裂的情况。

5)避免事项?

1.避免反复冻融
长时间储存在 2－8 ℃ 时，血清中的各种蛋白和脂蛋白可能聚集而形成沉淀或可见的混浊。
2.避免产生沉淀
解冻血清时，请随时将之摇晃均匀，使温度及成分均一，减少沉淀的发生。
血清分装时，须规则摇晃均匀（小心勿造成气泡），使温度与成分均一。
勿直接由 -20 ℃ 直接至 37 ℃ 解冻，因温度改变太大，容易造成蛋白质凝结而发生沉淀。勿将血清置于 37 ℃ 太久，否则血清会变得浑浊，同时血清中许多较不稳定的成份也会因此受到破坏，从而影响血清的品质。